蜜蜂人工授精技術
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蜜蜂人工授精技術在1927年取得成功，中國開展該項技術的研究始于1959年，20世紀80年代后，已達到國際先進水平，利用該技術取得了單雄授精、單雄多雌授精和自體授精的新突破。作者用聚乙烯授精針頭，使人工授精操作更加直觀、高效和安全，并且把在實驗室操作的實驗技術，實現了轉地蜂場在野外進行授精的重大突破，選育出喀（阡）黑環系、白山五號、松丹?、?號和蜜漿雙高產的黃環系等優質蜂王品種（系）。當前，蜜蜂的人工授精技術，在原種保純、雜交制種乃至工程育種中起到了不可替代的作用。
一、設備和生理液
1、儀器設備 人工授精儀組合、生物實體顯微鏡、二氧化碳鋼瓶、膠管、洗氣瓶、測微尺、血細胞記數板、雄蜂飛翔籠以及常規生化實驗儀器設備。
2、生理液制備 生理液主要用于稀釋、保護精液和沖洗器具。生理液有效成分的濃度、溶液的ph等均可影響精子的活力和授精效果。因此，生理液的配制要求十分嚴格。目前，較為常用的生理液主要有：
（1）基輔生理液（paufler，1974）：α-羥基檸檬酸三鈉2．43克；碳酸氫鈉0．21克；氯化鉀0．04克；磺胺0．30克；雙蒸水100毫升（ph8．4）。
（2）甘氨酸生理液：甘氨酸0．75克；氯化鈉0．58克；雙蒸水100毫升（ph8．6）。
（3）氯化鈉生理液：氯化鈉3．5克；抗生素（如硫酸鏈霉素）少許（約1．0克）；雙蒸水400毫升（ph7．0～7．3）。
二、授精的環境
蜜蜂人工授精工作，無菌操作至關重要。由于操作消毒不徹底，蜂王可能染病死亡或傳病給子代。在授精過程中，直接病原就是蜂王和雄蜂體表以及人的皮膚。因此，在進行人工授精過程中嚴格要求無菌操作是十分必要的，要求：窗明幾凈，地面清潔無浮塵，采精前2小時，用5％來蘇兒噴灑地面；臺面用75％酒精擦拭；空間用紫外線燈照射；小型器皿、刀、剪、鉤、針用煮沸鍋消毒至少30分鐘；塑料針頭和有機制品，用配有抗生素的消毒液、雙蒸水、生理液依次沖洗，所有已消毒的器物，均須妥善放置，謹防二次污染。所有用作滅菌的酒精和消毒劑，不得與雄蜂、雄蜂精液和蜂王接觸。
蜜蜂人工授精操作環境，除了要求無菌操作外，適宜的溫度也是十分重要的。溫度太低，蜂王容易凍僵，雄蜂活動遲緩而不利排精，給采精操作帶來困難。室溫在20℃～30℃，授精效果較為理想。
三、人工授精
1、精液采集
雄蜂選擇。 雄蜂出房12天后，即達性成熟，便可捕捉采精。性成熟雄蜂的捕捉方法，有利用顏色標記雄蜂日齡法、巢內直接選擇性成熟雄蜂法、巢門捕捉婚飛雄蜂法和捕捉幽閉飼養雄蜂法，但是無論哪種方法捕捉雄蜂，均要求所捕雄蜂種純、個大、健壯、活躍和性成熟。
強迫排精。 用左手拇指和食指從腹面捉住胸、腹部兩側，用右手拇指按壓雄蜂的腹部背板1節～3節處，然后三指配合，同時向腹部尾端施加壓力，強迫“陰莖”外翻并射精。注意用力適度，以保精液在“陰莖”頂端形成近球狀，以利采集且不易被污染。
精液采集。 雄蜂精液的采集有兩種方法：一是體視顯微鏡下，直接用進樣器逐只雄蜂采集精液；二是采用漂洗技術采集精液。目前，應用較普遍的方法是第一種，該法應用簡便快捷，隨采隨用，精子活力強，污染機會少，授精效果理想。其方法為：先將針頭吸入少許生理液和氣泡，然后，右手操縱進樣器，使針頭與精液接觸，后稍微拉開點距離，但二者并不斷開，這樣就能借助于精液本身的粘滯性，把覆蓋在白色粘液上的土黃色精液較完全地抽吸進針頭，然后繼續采集其它雄蜂的精液，但要注意：每2只雄蜂的精液間，不應出現氣泡隔離；待針頭內貯滿所需精液量后，用生理液封閉針頭，以防精液干涸或污染；將針頭外側粘附雜物用浸過抗生素的棉簽擦去后，便可提升針頭的位置，準備給蜂王授精。
2、精液注射
處女王的選擇。 處女王的質量關系到人工授精的效果和新建蜂群的質量，要求人工授精處女王個體大、腹部碩長、無殘損、行動穩健、性成熟。
處女王麻醉。 處女王裝入麻醉室后，安裝到授精儀上，開啟二氧化碳鋼瓶閥門，調節至每分鐘從洗氣瓶冒出300個氣泡為宜，麻醉30秒左右，蜂王進入昏迷狀態，直到授精完畢，方可解除麻醉。
3、授精
打開螫針腔。 蜂王麻醉后，調整顯微鏡，在鏡下移動背腹鉤操縱桿，使背腹鉤在探針配合下，分別鉤住背腹板頂端的中央位置，并向外側拉動背腹板，使其間距為3毫米～4毫米，然后再移動背鉤，使其“膨大”部分嵌入到螫針腔基部的三角縫內，再拉動背腹鉤，把背腹板間距拉至5毫米～6毫米。
進針注射。 螫針腔打開后，調整蜂王和針頭的角度，排除針頭尖中的生理液和氣泡后，使針尖接近陰道口，用探針壓住瓣突，將針尖徐徐推入陰道直至中部輸卵管，取出探針，將精液慢慢注入。一次性授精通常注入8微升精液；兩次性授精，每次各注4微升～5微升精液，其間隔24小時～48小時。授精完畢，10秒～15秒后退出針頭，取出蜂王，點上標記，待其復蘇后，送回原核心群或框式王籠暫時貯存。
四、人工授精后的管理
蜂王人工授精后，需要細心管理，注意以下幾個方面：首先，蜂王授精后要及時放回原核心群（或大群），使其能得到工蜂飼喂，不致受餓而影響發育；其次，要保證授精王所在蜂群的蜂數，以便蜜蜂能自行調節巢溫；因為，溫度是制約精子轉移的重要因素；另外，還要預防蜂王出巢進行自然交尾，方法是將蜂王剪翅或幽閉巢門，防止蜂王外出，也可利用大型框式王籠封閉觀察其產卵情況。
一、設備和生理液
1、儀器設備 人工授精儀組合、生物實體顯微鏡、二氧化碳鋼瓶、膠管、洗氣瓶、測微尺、血細胞記數板、雄蜂飛翔籠以及常規生化實驗儀器設備。
2、生理液制備 生理液主要用于稀釋、保護精液和沖洗器具。生理液有效成分的濃度、溶液的ph等均可影響精子的活力和授精效果。因此，生理液的配制要求十分嚴格。目前，較為常用的生理液主要有：
（1）基輔生理液（paufler，1974）：α-羥基檸檬酸三鈉2．43克；碳酸氫鈉0．21克；氯化鉀0．04克；磺胺0．30克；雙蒸水100毫升（ph8．4）。
（2）甘氨酸生理液：甘氨酸0．75克；氯化鈉0．58克；雙蒸水100毫升（ph8．6）。
（3）氯化鈉生理液：氯化鈉3．5克；抗生素（如硫酸鏈霉素）少許（約1．0克）；雙蒸水400毫升（ph7．0～7．3）。
二、授精的環境
蜜蜂人工授精工作，無菌操作至關重要。由于操作消毒不徹底，蜂王可能染病死亡或傳病給子代。在授精過程中，直接病原就是蜂王和雄蜂體表以及人的皮膚。因此，在進行人工授精過程中嚴格要求無菌操作是十分必要的，要求：窗明幾凈，地面清潔無浮塵，采精前2小時，用5％來蘇兒噴灑地面；臺面用75％酒精擦拭；空間用紫外線燈照射；小型器皿、刀、剪、鉤、針用煮沸鍋消毒至少30分鐘；塑料針頭和有機制品，用配有抗生素的消毒液、雙蒸水、生理液依次沖洗，所有已消毒的器物，均須妥善放置，謹防二次污染。所有用作滅菌的酒精和消毒劑，不得與雄蜂、雄蜂精液和蜂王接觸。
蜜蜂人工授精操作環境，除了要求無菌操作外，適宜的溫度也是十分重要的。溫度太低，蜂王容易凍僵，雄蜂活動遲緩而不利排精，給采精操作帶來困難。室溫在20℃～30℃，授精效果較為理想。
三、人工授精
1、精液采集
雄蜂選擇。 雄蜂出房12天后，即達性成熟，便可捕捉采精。性成熟雄蜂的捕捉方法，有利用顏色標記雄蜂日齡法、巢內直接選擇性成熟雄蜂法、巢門捕捉婚飛雄蜂法和捕捉幽閉飼養雄蜂法，但是無論哪種方法捕捉雄蜂，均要求所捕雄蜂種純、個大、健壯、活躍和性成熟。
強迫排精。 用左手拇指和食指從腹面捉住胸、腹部兩側，用右手拇指按壓雄蜂的腹部背板1節～3節處，然后三指配合，同時向腹部尾端施加壓力，強迫“陰莖”外翻并射精。注意用力適度，以保精液在“陰莖”頂端形成近球狀，以利采集且不易被污染。
精液采集。 雄蜂精液的采集有兩種方法：一是體視顯微鏡下，直接用進樣器逐只雄蜂采集精液；二是采用漂洗技術采集精液。目前，應用較普遍的方法是第一種，該法應用簡便快捷，隨采隨用，精子活力強，污染機會少，授精效果理想。其方法為：先將針頭吸入少許生理液和氣泡，然后，右手操縱進樣器，使針頭與精液接觸，后稍微拉開點距離，但二者并不斷開，這樣就能借助于精液本身的粘滯性，把覆蓋在白色粘液上的土黃色精液較完全地抽吸進針頭，然后繼續采集其它雄蜂的精液，但要注意：每2只雄蜂的精液間，不應出現氣泡隔離；待針頭內貯滿所需精液量后，用生理液封閉針頭，以防精液干涸或污染；將針頭外側粘附雜物用浸過抗生素的棉簽擦去后，便可提升針頭的位置，準備給蜂王授精。
2、精液注射
處女王的選擇。 處女王的質量關系到人工授精的效果和新建蜂群的質量，要求人工授精處女王個體大、腹部碩長、無殘損、行動穩健、性成熟。
處女王麻醉。 處女王裝入麻醉室后，安裝到授精儀上，開啟二氧化碳鋼瓶閥門，調節至每分鐘從洗氣瓶冒出300個氣泡為宜，麻醉30秒左右，蜂王進入昏迷狀態，直到授精完畢，方可解除麻醉。
3、授精
打開螫針腔。 蜂王麻醉后，調整顯微鏡，在鏡下移動背腹鉤操縱桿，使背腹鉤在探針配合下，分別鉤住背腹板頂端的中央位置，并向外側拉動背腹板，使其間距為3毫米～4毫米，然后再移動背鉤，使其“膨大”部分嵌入到螫針腔基部的三角縫內，再拉動背腹鉤，把背腹板間距拉至5毫米～6毫米。
進針注射。 螫針腔打開后，調整蜂王和針頭的角度，排除針頭尖中的生理液和氣泡后，使針尖接近陰道口，用探針壓住瓣突，將針尖徐徐推入陰道直至中部輸卵管，取出探針，將精液慢慢注入。一次性授精通常注入8微升精液；兩次性授精，每次各注4微升～5微升精液，其間隔24小時～48小時。授精完畢，10秒～15秒后退出針頭，取出蜂王，點上標記，待其復蘇后，送回原核心群或框式王籠暫時貯存。
四、人工授精后的管理
蜂王人工授精后，需要細心管理，注意以下幾個方面：首先，蜂王授精后要及時放回原核心群（或大群），使其能得到工蜂飼喂，不致受餓而影響發育；其次，要保證授精王所在蜂群的蜂數，以便蜜蜂能自行調節巢溫；因為，溫度是制約精子轉移的重要因素；另外，還要預防蜂王出巢進行自然交尾，方法是將蜂王剪翅或幽閉巢門，防止蜂王外出，也可利用大型框式王籠封閉觀察其產卵情況。
